Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展很慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现呼吸道自身免疫反应到经常出现1HG高血压诊疗症状的困难重重率在成年人中期就有极好的所述，多个呼吸道自身免疫反应特征性的成年人里有70%在肝细胞转换后10年内入院高血压，而随访15年的成年人这一比例减小到84%。相对之下，占诊疗1HG高血压一半以上的HG1HG高血压的发病机制还从未得到充分的研究工作。

越来越多的人开始适用分期系统对来定义1HG高血压的困难重重：个体在经常出现多种呼吸道自身免疫反应时进到第1先决条件，经常出现浓度异常时进到第2先决条件，经常出现症状时进到第3先决条件。一些多发呼吸道自身免疫反应特征性的个体，在1期和2期，困难重重较慢，并蓬勃发展为发病的1HG高血压。我们在此之前所述了一四组在首次检测到多种呼吸道自身免疫反应试样后据估计10年无高血压的想像中慢困难重重者，这四组患儿000人少，但特性比较指明。随后，我们发现呼吸道自身亚基特异性CD8+T亚基质质子化在困难重重想像中快的患儿里基本不实际上，但在近来发病和经常性实际上的高血压患儿里很容易检测到。这似乎表明，与困难重重患儿相对，这些患儿自身免疫质子化的缓冲进一步提高。

早期研究工作表明，尽管缓冲性T亚基质(Treg)数量正常，但高血压患儿实际上一些机能缺陷，其里包括对IL-2的质子化能力减低。此外，高血压患儿里的震荡CD4+T亚基质似乎对缓冲凸显抵抗性，表现为震荡T亚基质的依赖性增强，自然消除的Treg和体外消除的游离Treg，以及亚基经历的CD4+T亚基质里IL-2质子化增强。本研究工作的目的是所述了CD4+缓冲性T亚基质(Treg)在一小群想像中想像中快困难重重者里的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以青年人基础上的纵向研究工作，在21岁所列确诊的患儿亲友里检查1HG高血压的生命危险主因。我们在此之前所述了经常性想像中快困难重重者的特性，他们保持稳定多重呼吸道自身免疫反应特征性超过10年，但从未经常出现高血压的诊疗症状，慢性或非完成性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无高血压并愿意共享大量血液试样的想像中快困难重重者纳入T和B亚基质机能系统对性。在目前的研究工作里，8名慢困难重重者(SP四组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的呼吸道自身免疫反应特征性。所有的参加者都西北面1HG高血压困难重重的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身免疫反应对某些亚基的特征性质子化，然而，一名患儿不太可能西北面2期据估计6年，但从未经常出现诊疗症状，一名患儿被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集实验者试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据系统对性里对该酪氨酸完成了直接评质子。剥离外周血单个质子亚基质(PBMCs)，采用多参数流式亚基质心法和T亚基质依赖性试验性评质子酪氨酸里Treg的基频、遗传基因和机能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、举例来说和回归)完成无监理聚类系统对性，评质子Treg遗传基因。

结果：与肥胖酪氨酸相对，来自慢困难重重体的清醒CD4+T亚基质的监理聚类显示，转录的清醒CD4+ Treg基频减小，与利尿剂游离的TNFR相关亚基(GITR)理解减小有关。一名HbA1c升高的患儿与困难重重想像中快者和比如说的对照四组相对，Treg曲谱有所不同。机能推断，与肥胖酪氨酸相对，来自想像中快困难重重体的Treg介导的CD4+震荡T亚基质依赖性明显受损。表现为对震荡CD4+T亚基质CD25和CD134理解的依赖性减小。

示意图1 深入的遗传基因系统对性显示，CD4+Treg非典HG在慢困难重重字段里减小。由FlowSOM聚合的Treg三楼，组织起来在来自所有酪氨酸的来时CD4+CD45RA -亚基质上。根据标识物理解解剖出10个元簇:清醒T亚基质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T亚基质;HLA-DR + GITR +清醒T亚基质;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个不同Treg标识聚合的10个元簇的MST。每个节点代表者一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点四组一处上色。每个节点里的饼示意图声称单个标识的理解级别。(b)每个元聚类的热示意图，以显示整体标识理解。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)聚合示意图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对来说原子量为每个metacluster盒示意图表(原子量> 0.05%)确定为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T亚基质(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T亚基质(l)。橘色圆圈代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 适用CITRUS的外推证实，Treg基频的减小是困难重重想像中快的标志。分级门控(a - f)和柑橘系统对性(g-k)比较SP参加者和比如说的HD参加者在CD4+CD45RA−T亚基质上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的代表者性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解完成剥离，三维FlowSOM社会群体。(b) HD(白点)和SP(蓝点)四组以及酪氨酸SP 606(橘色)里CD25+ cd127的基频统计示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控集合的盒示意图表;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头显眼的簇被比对为SP和HD字段相互间的不同。(j)盒示意图表显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组里，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说原子量(比例)。(k)直方示意图显示每个簇的遗传基因(粉色)和Treg标识相对来说理解与历史背景理解(粉红色);上列，闪存Treg_3;一个大正要，闪存Treg_4。历史背景与所有其他簇里标识的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验

示意图3 与肥胖献血者相对，困难重重想像中快者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T亚基质元簇(清醒T亚基质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T亚基质;HLA-DR + GITR +清醒T亚基质;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个理解标识的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的理解热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR理解结合，显示直方示意图(c)和统计示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和验，p< 0.07(橘色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(粉红色)酪氨酸SP 606和比如说的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橘色)结合，显示直方示意图(e)和统计示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验

示意图4 来自想像中快困难重重的CD4+ treg亚基质依靠震荡CD4+T亚基质的能力减低。SP四组用粉红色的新线和圆圈声称，HD四组用黑色的新线和圆圈声称，橘色的新线/圆圈声称酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T亚基质完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标识为CFSE, Treg按观察的比例起始。用抗CD3 /28微珠重置亚基质，培训3天后完成流式亚基质心法检测。(a-d)与CD4+这样的话者相对来说应的treg培训(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培训。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE依赖性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百份。适用特征性对照(转录的拥护亚基质不含treg)计算依赖性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统对性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 震荡CD4+T亚基质对想像中快困难重重的T亚基质重置的依赖性更敏感。SP四组用粉红色的新线和圆圈声称，HD四组用黑色的新线和圆圈声称，橘色的新线/圆圈声称酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T亚基质完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标识，treg按观察的比例起始。用抗CD3 /28微珠重置亚基质，培训3天后完成流式亚基质心法(CD25反染)和亚基质因子系统对性。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者一同培训。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE依赖性%-(b)。(c,d) CD25依赖性%-(c)和CD134依赖性%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统对性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推断的结论是，来自想像中快困难重重子的重置清醒CD4+Treg在GITR理解里得到了扩展和珍贵，阐释了进一步研究工作Treg在1HG高血压可能性个体里的异质性的合理性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28