Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者成果缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现口内自身免疫球蛋白到显现1标准型冠心病诊疗病症的成果不下在婴幼儿时期就有很好的描绘出，多个口内自身免疫球蛋白非典型的婴幼儿中的有70%在血清变换后10年内患上冠心病，而随访15年的婴幼儿这一人口比例减低到84%。正因如此，占诊疗1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的肺癌机制还从未得到充分的研究。

越来越多的人开始采用仍须系统来判别1标准型冠心病的成果：有机体在显现多种口内自身免疫球蛋白时转回第1阶段，显现体温异常时转回第2阶段，显现病症时转回第3阶段。一些多发口内自身免疫球蛋白非典型的有机体，在1期和2期，成果较慢，并发展为肺癌的1标准型冠心病。我们之前描绘出了一三组在首次检查到多种口内自身免疫球蛋白样品后至极多10年无冠心病的极慢成果者，这三组病症人数极多，但特点极其明确。随后，我们发掘出口内自身复合物特异性CD8+T巨噬细胞反应该会在成果平稳的病症中的基本不存在，但在早先肺癌和长期存在的冠心病病症中的很易于检查到。这意味著说明，与成果病症相更为，这些病症自身免疫巨噬细胞的通气增强。

早期研究说明，尽管通气性T巨噬细胞(Treg)数量正常人，但冠心病病症存在一些功能性弱点，其中的最主要对IL-2的反应该会能力下降。此外，冠心病病症中的的物理现象CD4+T巨噬细胞意味著对通气更具抵抗性，表现为物理现象T巨噬细胞的抑制作用减弱，自然环境归因于的Treg和体外归因于的抑止Treg，以及复合物经历的CD4+T巨噬细胞中的IL-2反应该会减弱。本研究的借此是描绘出了CD4+通气性T巨噬细胞(Treg)在一个大极平稳成果者中的的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以老年人系统化的纵向研究，在21岁所列确诊的病症亲族中的检查1标准型冠心病的危险考量。我们之前描绘出了长期平稳成果者的特点，他们维持多重口内自身免疫球蛋白非典型超过10年，但从未显现冠心病的诊疗病症，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续维持无冠心病并不想透过大量血液样品的平稳成果者纳入T和B巨噬细胞功能性研究。在目前的研究中的，8名慢成果者(SP三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的口内自身免疫球蛋白非典型。所有的旁观者都处于1标准型冠心病成果的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫球蛋白对某些复合物的非典型反应该会，然而，一名病症已经处于2期至极多6年，但从未显现诊疗病症，一名病症被确诊为冠心病，该患者72岁，在野外检验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在研究小组中的对该抑止同步进行了实质上检验。转化外周血单个质子巨噬细胞(PBMCs)，采用多数值流式巨噬细胞拳法和T巨噬细胞抑制作用试验检验抑止中的Treg的增益、表标准型和功能性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接)同步进行无指导聚类研究，检验Treg表标准型。

结果：与身体健康抑止相更为，来自慢成果体的无意识CD4+T巨噬细胞的指导聚类说明，启动时的无意识CD4+ Treg增益减低，与免疫抑制抑止的TNFR无关蛋白(GITR)暗示减低有关。一名HbA1c升高的病症与成果平稳者和冗余的对照三组相更为，Treg谱有所相同。功能性研究说明，与身体健康抑止相更为，来自平稳成果体的Treg特异性的CD4+物理现象T巨噬细胞抑制作用明显受损。表现为对物理现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134暗示的抑制作用减低。

左图1 系统地的表标准型研究说明，CD4+Treg亚标准型在慢成果配置文件中的减低。由FlowSOM聚合的Treg室，挤满在来自所有抑止的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物暗示鉴定出10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)采用9个相同Treg标明聚合的10个元簇的MST。每个结点均是由一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在结点三组周围上色。每个结点中的的饼左图对此单个标明的暗示级别。(b)每个元聚类的热左图，以说明整体标明暗示。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)聚合左图，以及FlowSOM比对的每个元簇的很薄。(e-l)相对重元素为每个metacluster装有线或左图(重元素> 0.05%)确切为HD和SP三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。浅蓝色白点均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩鉴定。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 采用CITRUS的预测模标准型证实，Treg增益的减低是成果平稳的标志。这两项特异性(a - f)和水果研究(g-k)更为SP旁观者和冗余的HD旁观者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的纪念性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR暗示同步进行转化，演示FlowSOM社群。(b) HD(白点)和SP(蓝点)三组以及抑止SP 606(浅蓝色)中的CD25+ cd127的增益摘要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+特异性兄集的装有线或左图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度制做，箭头明显的簇被比对为SP和HD配置文件两者之间的相同。(j)装有线或左图说明了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组中的，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对重元素(人口比例)。(k)直方左图说明每个簇的表标准型(红色)和Treg标明相对暗示与氛围暗示(浅蓝色);上列，缓存Treg_3;下面悄悄，缓存Treg_4。氛围与所有其他簇中的标明的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩鉴定

左图3 与身体健康献血者相更为，成果平稳者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个暗示标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的暗示热左图(sp606不最主要在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR暗示结合，说明直方左图(c)和摘要左图(d)。Wilcoxon配对记号秩和鉴定，p< 0.07(浅蓝色)所有抑止最主要，p< 0.05(浅蓝色)抑止SP 606和冗余的HD不最主要在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR暗示，从这两项特异性，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)结合，说明直方左图(e)和摘要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩鉴定

左图4 来自平稳成果的CD4+ treg巨噬细胞控制物理现象CD4+T巨噬细胞的能力下降。SP三组用浅蓝色的线或和白点对此，HD三组用白色的线或和白点对此，浅蓝色的线或/白点对此抑止sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按推论的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠增殖巨噬细胞，养成3天后同步进行流式巨噬细胞拳法检查。(a-d)与CD4+需要的话者相对应该的treg养成(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者养成。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑制作用%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%-。采用非典型对照(启动时的拥护巨噬细胞内含treg)计算抑制作用%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

左图5 物理现象CD4+T巨噬细胞对平稳成果的T巨噬细胞增殖的抑制作用更敏感。SP三组用浅蓝色的线或和白点对此，HD三组用白色的线或和白点对此，浅蓝色的线或/白点对此抑止sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按推论的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠增殖巨噬细胞，养成3天后同步进行流式巨噬细胞拳法(CD25反染)和趋化因兄研究。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同养成。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑制作用花红(b)。(c,d) CD25抑制作用花红(c)和CD134抑制作用花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中的的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

论点：我们证明了的论点是，来自平稳成果兄的增殖无意识CD4+Treg在GITR暗示中的得到了扩展和丰富，强调了进一步研究Treg在1标准型冠心病风险有机体中的的表征的必要性。

注解中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28